对裸鼠进行姜黄素注射处理后，发现姜黄素能够通过抑制NF-kB的活性继而阻碍裸鼠口癌细胞肿瘤的生长。

高浓度的1/2为低浓度点(其内标苯并[P]芘的浓度值不变)，用此种浓度的混合标准进行色谱分析，结果见色谱图。①预柱：ultrasphere ODS 10m，4mm4.5cm。

把一定量的维生素A、-生育酚、-生育酚、-生育酚及内标苯并[e]芘溶液混合均匀。维生素标准曲线绘制是以维生素峰面积与内标峰面积之比为纵坐标，维生素浓度为横坐标绘制，或计算回归方程。③流动相：甲醇+水=98+2，混匀，临用前脱气。⑪氢氧化钾溶液(0.5mol/L)。②纯化：先用30～50mL石油醚淋洗分离柱，然后将试样提取液倒入柱内，再用石油醚继续淋洗。

第四层：加入2～4g无水硫酸钠。(二)维生素D的测定三氯化锑比色法：(AOAC法)1、原理维生素D在三氯甲烷溶液中，与三氯化锑结合生成一种橙黄色化合物，颜色的深浅与维生素D的浓度成正比，在500nm波长下测定其吸光值。功能性发酵饲料偏重于对动物肠道健康的益生作用，通常选用玉米、豆粕等优质的饲料原料供微生物生长利用，目的是诱导微生物产生大量的益生菌及其有益代谢产物。

微生物发酵饲料主要是使用多种饲料原料发酵混合饲料。发酵前对发酵原料进行预处理，将物料进行熟化和添加酶制剂，运用菌酶协同发酵技术，将微生物发酵和酶解预消化有机结合，能够加速底物中营养物质的分解，提高发酵效率和发酵深度，使饲料原料降解的更彻底，产生更多的的小分子物质，更有利于微生物充分利用饲料中的营养物质代谢生长，产生更多的活菌和代谢产物。目前我国发酵饲料大多使用农副糟渣等廉价饲料原料经呼吸膜袋式固体发酵制成，属于厌氧发酵。发酵豆粕是最常见的单一发酵饲料。

发酵饲料发酵完成以后的含水量普遍较高(30％~45％)。4微生物发酵饲料存在的问题4.１菌种问题微生物发酵饲料缺乏强制性国标，在菌种使用方面存在一定的安全风险，使用携带抗生素耐药基因的菌种或未经安全评估的基因工程菌的情况较难控制。

过高的添加比例会稀释营养造成动物所需能量不足，对动物的生产性能反而不利。发酵饲料在动物日粮中添加比例过高会造成营养不足，动物采食一段时间后容易出现消瘦、鸡蛋变小等情况。5微生物发酵饲料的应用前景微生物发酵饲料可利用农业生产中的非常规原料作为发酵底物，充分利用饲料资源，降低养殖饲料成本，提高生产效益。对发酵饲料进行烘干处理，有利于发酵饲料的储存运输及在制粒系统中添加。

此外，生料发酵的成品发酵饲料耐储存性能较差，开包后不及时用完由于杂菌发酵作用极易腐败变质。足够的菌种接种量和质量保证的饲料原料，对发酵饲料的品质非常重要。发酵饲料富含大量有益微生物、各种酶、抑菌物质和多种代谢产物，能够有效降低饲料中的抗营养因子，提高饲料消化利用率，维持动物肠道健康，提高动物免疫力，提高饲料适口性，促进动物生长。如果杂菌中含有毒素产生菌，必然会产生毒素。

选择菌种时，应选用国家法律法规允许使用的安全的有益微生物作为发酵菌种，同时对菌种的繁殖性能、产酸能力、代谢产物的抑菌作用有明确的认识，并对接种的菌量和比例进行评估。但烘干过程中益生菌、有机酸和代谢产物损失较大，尤其是乳酸菌和酵母菌几乎会损失殆尽，极大影响发酵饲料的饲用效果。

如何将发酵饲料成品的水分降低而保留高活性的活菌和有益代谢产物，使其能普遍应用到全价颗粒料中，是发酵饲料要解决的技术难题之一。一方面含水量过高使发酵饲料在混合仓内与其他饲料原料混合不均匀，容易出现结团堵塞饲料加工设备。

4.2杂菌问题杂菌是微生物发酵饲料中存在的较大问题。如动物采食含大量杂菌的发酵饲料，就极易出现腹泻拉稀等肠道健康问题，安全隐患较大。发酵目的不同，发酵饲料选用的饲料原料也有很大差异。另一方面过高的含水量也使饲料容易发生霉变，贮存期大大缩短。饲料原料中存在着大量杂菌，包括多种细菌、大肠杆菌和霉菌等，其数量和饲料原料的新鲜度有关，菌量级别从千级到千万级。将玉米皮、糠麸、构树叶、桑叶粉、果渣、豆腐渣等非常规原料通过微生物发酵作用添加到动物饲料中，能够拓宽饲料资源，节约饲料成本。

生料发酵过程中，微生物利用的营养大多数为额外添加的易利用营养物质，极少量的利用饲料中的营养，发酵不彻底，对于饲料原料的理化性质和质量的改善效果不大，往往无法获得大量的有益菌和代谢产物。大多数发酵饲料在接种发酵菌种前并未经过灭菌预处理而是直接进行接种。

芽孢杆菌在发酵过程中耗氧产热使料温上升有利于乳酸菌和酵母菌更快地进行繁殖代谢。一方面微生物发酵饲料中的淀粉等大分子营养物质经过微生物发酵作用后能量降低。

目前发酵饲料多数属于生料发酵，即没有对发酵原料进行灭菌和熟化预处理。芽孢杆菌活菌体随饲料进入肠道后也能萌发耗氧营造厌氧环境，优化肠道内乳酸菌的生长环境，提高动物免疫水平。

2.3芽孢杆菌芽孢杆菌是一种好氧菌，在饲料发酵过程中，芽孢杆菌的作用主要是消耗物料中的氧气为乳酸菌和酵母菌的生长提供厌氧环境。声明：本文所用图片、文字来源《中文科技》，版权归原作者所有。3微生物发酵饲料的种类及发酵方式通常按饲料原料组成的不同，将微生物发酵饲料分为发酵单一饲料和发酵混合饲料。杂菌发酵也会使发酵饲料产生一定的酸味。

在发酵过程中，杂菌生长必然会带来大量次级代谢产物对模型回归方程各项进行方差分析，结果表3显示，模型的P＜0.05，表明本实验所采用的二次模型显著，色差综合评定指标与所考察自变量之间的线性关系显著。

在此条件下，南湖菱色差综合评定指标△E变化值理论上可达12.66％。模型确定系数R2=0.8465，修正后确定系数AdjR2每0.8307，表明83.07％的实验数据变异性可用该模型来解释。

三、BoxBehnken设计方案与结果分析1、BoxBellllken设计方案实验设计在正交试验设计中，根据单因素试验结果，选取处理时间、抗坏血酸、柠檬酸和乙二胺四乙酸二钠为试验因素，分别用A、B、C、D依次表示处理时间、抗坏血酸、柠檬酸和乙二胺四乙酸二钠等4个影响南湖菱护色效果的因素进行考察，以色差综合评定指标△E作为响应值，用以评估误差。为验证该法的可行性，采用上述优化护色条件进行南湖菱护色试验，为方便试验操作，将上述优化乙二胺四乙酸二钠浓度为0.60％，抗坏血酸浓度1％，按照优化条件做3组平行试验，测得南湖菱色差综合评定指标△E实际平均值为12.31％，试验结果与模型预测相差2.75％。

设计四因素三水平的响应分析实验，建立二次多项式回归模型，各试验因素水平及编码设计见表1。2、结果与讨论按照BoxBehnkenDesign(BBD)实验设计方法的统计学要求，对色差综合评定指标△E值的优化实验结果进行多元非线性回归分析，得到护色时间、抗坏血酸浓度、柠檬酸浓度、乙二胺四乙酸二钠浓度对南湖菱色差综合评定指标△E值(Y)的影响，利用DseigExpert软件对表2中的响应值进行多元二次回归拟合分析，确立如下回归方程预测模型：Y=2.5036140.080911A+0.08652B0.276572A2+0.200314AD一0.256617820.222845BD一0.286165C20.266613D2。3、最优条件预测和实验验证根据DesignExPert建立的数学模型进行参数的最优化分析，得出南湖菱护色剂的优化条件为时间5.00min、抗坏血酸浓度0.99％、柠檬酸浓度1.00％、乙二胺四乙酸二钠浓度为0.59％。交互作用AD、BD、CD的P值均＜0.05，说明时间与乙二胺四乙酸二钠、抗坏血酸与乙二胺四乙酸二钠、柠檬酸与乙二胺四乙酸二钠对响应值交互作用明显。

由F值可以看出，影响南湖菱护色工艺的各因素主效关系为抗坏血酸(B)＞时间(A)＞乙二胺四乙酸二钠(D)＞柠檬酸(C)。在该条件下进行验证试验，实际测得南湖菱色差综合评定指标△E为12.31％，预测值相对误差较小，这一结果证实了实验优化得到的参数具有较高的可靠性，从而也证明了响应面分析优化法在确定南湖菱护色工艺可行性。

声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。四、结论本文研究了以南湖菱护色剂配方最优条件，以护色时间、抗坏血酸、柠檬酸、乙二胺四乙酸二钠的浓度为单因素进行实验，并根据实验的实际可操作性，得到最佳护色工艺：时间5.00min、抗坏血酸浓度1.00％、柠檬酸浓度1.00％、乙二胺四乙酸二钠浓度为0.60％。

失拟项中P＞0.05，影响不显著，表明所选模型适合，可以用来进行响应值(色差综合评定指标)的预测。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：乙二胺四乙酸二钠，抗坏血酸，柠檬酸。